ИФА с плохим результатом?Следуйте за нами, чтобы выбрать правильную пластину Elisa.
Выбор подходящего планшета для ИФА — первый шаг к успешному ИФА-эксперименту, но многие люди игнорируют это. Когда люди проводят эксперименты, они часто рассматривают только сам эксперимент, но не знают, что продукт часто оказывает большое влияние на эксперимент. Правильный подбор продуктов будет способствовать успеху эксперимента. Мы обычно учитываем следующие факторы при проведении экспериментов ELISA:
1. Форма дна
В настоящее время производители проектируют лунки с ферментной меткой как независимые колонки и надлежащим образом увеличивают расстояние между лунками, чтобы их можно было разделить независимо друг от друга, тем самым сводя к минимуму перекрестное загрязнение. Различные типы планшетов Elisa имеют разную форму дна лунки. Вот некоторые распространенные формы дна отверстий:
Плоское дно: дно горизонтальное, также называемое дном F. Свет не будет отражаться через дно, которое может пропускать свет в наибольшей степени. Используйте для экспериментов, требующих круглого дна для видимости или по другим причинам.
Круглое дно: также известное как U-образное дно, обеспечивает наилучшие результаты очистки и гибридную производительность, подходит для применений, в которых необходимо проверять отложения.
C-образное дно: может обеспечить хороший эффект очистки между плоским и круглым дном, сочетая при этом преимущества плоского дна.
Коническое дно: Также известное как V-образное дно, оно подходит для точного отбора и хранения микропроб для оптимального извлечения небольших объемов.
2. Цвет тарелки Elisa
Пластина Elisa бывает трех цветов: прозрачная, черная и белая.
В большинстве ИФА в качестве экспериментальных материалов выбирают прозрачные планшеты. Белые и черные пластины ELISA обычно используются для обнаружения люминесценции. Сама черная пластина для ИФА поглощает свет, поэтому ее сигнал слабее, чем у белой пластины для ИФА. Пластины Black Elisa обычно используются для обнаружения более сильного света, например, для обнаружения флуоресценции; напротив, белые пластины ELISA могут использоваться для обнаружения более слабого света и часто используются для общей хемилюминесценции и проявления цвета субстрата (например, двойная люцифераза). анализ репортерного гена).
3. Материал пластины Elisa
Распространенными материалами являются полиэтилен (ПЭ), полипропилен (ПП), полистирол (ПС), поливинилхлорид (ПВХ) и поликарбонат (ПК).
Наиболее широко используемыми материалами в ELSIA являются полистирол и поливинилхлорид. Мягкая плита из поливинилхлорида тонкая, ее можно резать, а цена невысокая. Недостатком является то, что отделка не такая хорошая, как у пенополистирольной плиты, а дно отверстия не такое ровное, как у пенополистирола. Но соответствующее значение фона также увеличится. Обычно на поверхности планшета для ELISA проводят ионную прививку, а активные функциональные группы, такие как альдегидные группы, аминогруппы и эпоксидные группы, вводят в поверхность полимера для улучшения характеристик поверхности подложки.
4. разные механизмы связывания
Эффективное связывание материала покрытия с нижней поверхностью планшета является важным шагом в ELISA. Поэтому перед экспериментом необходимо тщательно проанализировать структурные характеристики и химические свойства покрываемого вещества, чтобы выбрать подходящую пластину для ELISA. Вообще говоря, существует несколько способов связывания материала покрытия с нижней частью пластины: пассивная адсорбция, ковалентное связывание и аффинный захват.
Пассивная адсорбция: механизм пассивной адсорбции сложен, и связь между материалом покрытия и нижней частью пластины в основном зависит от межмолекулярных сил (силы Ван-дер-Ваальса) и водородных связей. В большинстве ELISA связывание вещества покрытия с нижней частью планшета осуществляется за счет пассивной адсорбции. Как правило, связывание между антигенами (или антителами) средней и большой молекулярной массы и дном планшета осуществляется за счет пассивной адсорбции. Гидрофобные/гидрофильные характеристики нижней поверхности планшета часто учитываются при выборе планшета для ELISA. В следующей таблице перечислены области применения и использование различных гидрофильных поверхностей подложек:
гидрофильный | Привязка приоритета | Основное использование |
- | Молекулы, содержащие значительные гидрофобные области, такие как: липиды, липопротеины, крупные белки | Антиген ИФА, ФЛА, ЛИА |
плюс | Биомолекулы с гидрофильными/гидрофобными свойствами, такие как белки среднего и крупного размера, иммуноглобулины, альбумин | Сэндвич-ИФА с двойными антителами, ИФА с антигенами |
плюс плюс | Биомолекулы с гидрофильными/гидрофобными свойствами, такие как белки от малых до больших, иммуноглобулины, альбумин, ЛПС, фосфорилированные белки, гликопротеины | ИФА с двойными антителами, ФИА, ЛИА |
плюс плюс плюс | Гликопротеины, полярные молекулы липидов, фосфолипиды, кардиолипиды | ИФА на антиген |
Аффинный захват: Аффинный захват основан на специфическом связывании меченых макромолекул с соответствующими рецепторами. Меченые макромолекулы могут быть получены либо химическим связыванием, либо с помощью генной инженерии.
Особенности Affinity Capture:
1.высокая специфичность
2. Может улучшить соотношение сигнал-шум результатов измерений
Наиболее распространенными поверхностями дна скважины являются: поверхность, покрытая стрептавидином (стрептавидином); Поверхность, покрытая хелатом никеля (Nickel Chelate), и поверхность, покрытая глутатионом (Glutathione, GSH).
3. Поверхность стрептавидина: высокая аффинность и специфичность стрептавидина и биотина используются для реализации связывания нижней пластины с белком с покрытием.
4. Поверхность хелата никеля: хелат никеля прикрепляется к поверхности полимера для связывания слитых белков с His (гистидиновыми) метками.
5. Поверхность глутатиона: использование ферментативной и субстратной специфичности между глутатионом и глутатионсульфгидрилтрансферазой (GST) для достижения связывания нижней пластины с белком оболочки.
Почему стоит выбрать пластину BKMAM Elisa?
Изготовлен из 100-процентного полистирола,
Подходит для адгезивной клеточной культуры,
Плоское основание, равномерная толщина и одинаковый размер для реактивных полюсов,
Стерильный с индивидуальной упаковкой,
Высокое качество по заводской цене.
