Основные условия для клеточной культуры
1. Подходящая среда для культивирования клеток
Подходящая среда для культивирования клеток является одним из наиболее важных условий для роста и пролиферации клеток in vitro. Культуральная среда не только обеспечивает питание клеток и основные вещества, способствующие росту и пролиферации клеток, но также обеспечивает живую среду для роста и размножения культивируемых клеток.
2. Качественная сыворотка
В настоящее время большинство синтетических сред требуют добавления сыворотки. Сыворотка является одним из наиболее важных компонентов среды для культивирования клеток, она содержит различные факторы роста и другие питательные вещества, необходимые для роста клеток.
3. Постоянная температура роста клеток
Для поддержания интенсивного роста культивируемых клеток необходима постоянная и соответствующая температура.
4. Подходящая газовая среда
Газ является одним из необходимых условий для выживания клеток млекопитающих, а необходимые газы в основном кислород и углекислый газ.
5. Температура клеточной культуры
Для поддержания интенсивного роста культивируемых клеток должна быть постоянная и подходящая температура. Разные типы клеток предъявляют разные требования к температуре культивирования. Стандартная температура для культуры клеток человека составляет 36,5 градусов ± 0,5 градусов. Отклонение от этого температурного диапазона повлияет на нормальный метаболизм клеток и даже погибнет.
6. Подходящая газовая среда
Газ является одним из необходимых условий для выживания культуры клеток млекопитающих, а необходимые газы в основном представляют собой кислород и углекислый газ. Кислород участвует в цикле трикарбоновых кислот, производя энергию для роста и пролиферации клеток и синтезируя различные компоненты, необходимые для роста клеток.
Обычное заражение клеточной культуры
1. Бактериальное заражение
Бактериальное заражение является наиболее распространенным. Как только операция будет немного неправильной, это приведет к загрязнению клеток. После бактериального загрязнения он будет выглядеть как черные тонкие полоски песка при наблюдении под микроскопом. Палочковидные и др. Во-вторых, питательная среда желтеет и мутнеет, в чашке Петри отчетливо видны мелкие пескообразные осадки, время от времени появляется посторонний запах.
2. Грибковое заражение
Загрязненный грибками культуральный раствор прозрачен и прозрачен, в отличие от большой вспышки бактериальной инфекции, поэтому его трудно обнаружить на ранней стадии. Иногда под микроскопом он выглядит как нить, иногда как коралл, и постепенно вырастает очень тонкая черная нить. Когда уже слишком поздно, клетки трудно спасти.
3. Заражение плесенью
В соответствии с грибковыми инфекциями, поскольку культуральная среда прозрачна, грибковое заражение трудно обнаружить на ранней стадии, когда часто бывает слишком поздно. В культуральной среде медленно появлялись хлопьевидные примеси, а нитевидные массы плавали под микроскопом, как сережки на ветру. Клетки все еще могут расти, но со временем клетки изнашиваются и перестают расти.
4. Микоплазменная инфекция
Питательная среда становится мутной. После заражения клеток микоплазмой цитопатические изменения не выражены, но состояние клеток ухудшается, рост замедляется. Под микроскопом могут быть небольшие черные пятна, но культуральная среда обычно не мутная. После пассирования клеток появлялись межклеточные черные пятна, клетки были вакуолизированы, многие клетки напоминали апоптоз и некроз. В конце концов, клетки всплывали и полностью умирали.
Предотвращение загрязнения клеток
Установление хороших правил и положений может иметь большое значение для снижения загрязнения клеток. Включая систему доступа, рабочие нормы и систему ежедневного управления.
Система доступа: включая персонал и материалы. Персонал должен быть обучен, прежде чем он сможет работать самостоятельно, и он должен соответствовать требованиям к ношению перед входом в лабораторию, таким как белые халаты, изолирующие халаты, маски, перчатки и т. д. Что касается необходимых предметов, предметы многоразового использования должны быть строго стерилизованы и стерилизованы, а приобретаемые товары необходимо приобретать по обычным и надежным каналам. Недавно приобретенные элементы следует протестировать и проверить перед использованием.
Рабочие спецификации: Лучше всего сформулировать спецификации для рутинных операций, и персонал лаборатории должен следовать рабочим спецификациям, которые нельзя изменить по своему желанию, а также развивать хорошие рабочие привычки для лабораторного персонала. Например, после всасывания наконечник пипетки не будет выдвигаться в среду во второй раз, и достаточное количество среды будет всосано за один раз. При добавлении жидкости жидкость следует добавлять в виде суспензии, насколько это возможно, что может эффективно предотвратить заражение микоплазмой и перекрестное заражение клеток. Кроме того, если возможно, работайте только с одной клеточной линией за раз, и лучше иметь небольшой временной интервал между ячейками, чтобы избежать перекрестного загрязнения.
Система ежедневного управления: Включает в себя правила и методы использования, очистки и обслуживания окружающей среды и расходных материалов, реагентов и т. д. Также имеется управление расходом, инвентаризацией и закупкой реагентов и расходных материалов, в том числе двухуровневое управление запасами образцы клеток. Для источников загрязнения, которые нелегко найти, лучше всего проводить регулярное тестирование, в основном на микоплазменное загрязнение и перекрестное загрязнение клеток.
BKMAM Bio предоставляет соответствующие расходные материалы для культивирования клеток:
Одноразовые пластиковые круглые/квадратные чашки Петри:
Полистирол высокой прозрачности (PS);
Поверхность гладкая и плоская, оптических искажений клеток под микроскопом нет;
Конструкция штабелирования упрощает штабелирование и хранение;
Стерилизация оксидом этилена (ЭО);
Износостойкость и коррозионная стойкость.
Адекватная обработка чашек для клеточных культур:
Полистирольный материал (ПС);
Электронно-лучевая стерилизация, без пирогенов, без токсинов;
Вакуумно-плазменная обработка поверхности, отличная адгезия клеток;
Поверхность гладкая и плоская, оптических искажений клеток под микроскопом нет;
Штабелируемая конструкция упрощает штабелирование и хранение.
Пластиковые планшеты для культивирования клеток:
Полистирольный материал (ПС);
Подходит для нормальных клеточных культур, неприлипающих пластин для обработки;
Без пирогенов, без токсинов, стерилизованы;
Легкая независимая упаковка типа разрыва, простая в эксплуатации;
Адгезивная обработка планшетов для культивирования клеток:
Полистирольный материал (ПС);
Адгезивное лечение (лечение TC) пластинчатого типа, подходящее для культуры адгезивных клеток;
Без пирогенов, без токсинов, стерилизованы;
Легкая независимая упаковка типа разрыва, простая в эксплуатации;
Все с плоским дном.
Адгезивная обработка колб для клеточных культур:
Полистирольный материал (ПС);
Электронно-лучевая стерилизация, без пирогенов, без токсинов;
Вакуумно-плазменная обработка поверхности, отличная адгезия клеток;
Дышащий чехол, который способствует газообмену и препятствует прохождению микроорганизмов.
Внутренние/внешние спиновые криопробирки:
100% чистый полипропилен (PP);
Может выдерживать 15 фунтов на квадратный дюйм, 121 градусная стерилизация;
Стенка трубки утолщена, а корпус трубки имеет шкалу и область для письма;
Между резьбой крышки трубы и телом трубы имеется силиконовое кольцевое уплотнение для обеспечения герметичности;
Без ДНКазы, без РНКазы, без пирогена, без эндотоксина.
