Знания о микробах, которые вам нужны
Микроорганизмы — это группа мельчайших организмов, широко существующих в природе и невидимых невооруженным глазом, которые необходимо увеличивать в сотни, тысячи или даже десятки тысяч раз с помощью оптического микроскопа или электронного микроскопа. Их преимущества заключаются в небольшом размере, простой структуре, быстром воспроизведении, легком изменении и сильной способности адаптироваться к окружающей среде.
Классификация микроорганизмов:
Существует множество видов микроорганизмов, по крайней мере, более 100000 видов. По своему строению, химическому составу, образу жизни и другим различиям их можно разделить на три категории.
Ядро эукариотической микробной клетки имеет более высокую степень дифференцировки, включая ядерную оболочку, ядрышко и хромосомы; цитоплазма имеет полные органеллы (такие как эндоплазматический ретикулум, рибосомы и митохондрии и др.). Грибы относятся к этому типу микроорганизмов.
Прокариотические микробные клетки имеют низкую степень ядерной дифференцировки, только примитивную нуклеоплазму, без ядерной оболочки и ядрышка; органоиды не очень полные. Существует много видов таких микроорганизмов, включая бактерии, спирохеты, микоплазмы, риккетсии, хламидии и актиномицеты.
Бесклеточные микроорганизмы не имеют типичной клеточной структуры и ферментной системы для выработки энергии и могут расти и размножаться только в живых клетках. К этому типу микроорганизмов относятся вирусы.
Разделение и очистка микроорганизмов
Микробная культура, содержащая более одного вида, называется смешанной культурой. Если все клетки колонии произошли от одной родительской клетки, то колония называется чистой культурой. При идентификации видов бактерий обычно требуется, чтобы используемые микроорганизмы были чистыми культурами. Процесс получения чистой культуры называется разделением и очисткой, и существует множество методов.
1. Метод заливки тарелки
Сначала микробную взвесь разводят сериями, а определенное количество разведения полностью смешивают с растворенной питательной агаровой средой, поддерживаемой при температуре около 40-50 градусов, после чего смесь выливают в стерильную чашку Петри. После затвердевания планшет инкубировали вверх дном в постоянной камере. Одну клетку размножают для образования колонии, одну колонию берут для приготовления суспензии, и описанные выше шаги повторяют несколько раз для получения чистой культуры.
2. Метод покрытия плоской пластины
Сначала микробную взвесь надлежащим образом разводят, и определенное количество разведения помещают на стерильную чашку с затвердевшим питательным агаром, а затем стерильным стеклянным шпателем равномерно распределяют разведение по поверхности среды. Одна колония может быть получена путем инкубации при постоянной температуре.
3. Метод разметки пластин
Самый простой способ выделения микроорганизмов – штрихование. Нанесите штрихом небольшое количество культуры на чашку, используя стерильную петлю. Существует много методов скрининга. Обычными методами скрайбирования, которые с большей вероятностью будут выглядеть как одна колония, являются метод косой черты, метод кривой, метод квадрата, метод излучения и метод четырех сеток. Когда инокуляционная петля движется назад по поверхности среды, бактериальная жидкость на инокуляционной петле постепенно разбавляется, и, наконец, на начерченной линии рассыпается одна клетка. После культивирования каждая клетка вырастает в колонию.
4. Метод обогащения культуры
Метод и принцип метода обогащения культур очень просты. Мы можем создать условия, которые позволяют расти только нужным микробам, и в этих условиях нужные микробы могут эффективно конкурировать с другими микробами и намного превосходить другие микробы по способности к росту. Если необходимо выделить некоторых облигатных паразитов, образцы должны быть инокулированы в соответствующие популяции восприимчивых клеток-хозяев для роста в больших количествах. Чистые паразитарные бактерии можно получить повторным посевом.
5. Анаэробный метод
В лаборатории для выделения некоторых анаэробных бактерий пробирку, содержащую исходную среду, можно использовать в качестве сосуда для культивирования, а пробирку можно нагревать на кипящей водяной бане в течение нескольких минут, чтобы удалить растворенный в среде кислород. . Затем его быстро охлаждают и инокулируют. После инокуляции на поверхность среды добавляли стерильный парафин для изоляции среды от воздуха. Другой метод заключается в замене газа в среде на N2 или CO2 после инокуляции, а затем закрытии горловины пробирки над пламенем. Иногда для более эффективного выделения некоторых анаэробных бактерий выделенный образец можно инокулировать на среду, а затем чашку Петри можно поместить в полностью герметичный прибор для культивирования анаэробов.
6. Метод выделения одной клетки (или одной споры)
Чтобы получить чистую культуру, необходимо использовать метод микросепарации для непосредственного выделения отдельных клеток или отдельных особей из смешанных популяций для культивирования. Для более крупных микроорганизмов можно выделить одну особь с помощью капилляра. Для микроорганизмов с относительно небольшими особями требуется микроманипулятор для взятия одиночных микробных клеток или спор с помощью капилляра или микроиглы, крючка, петли и т. д. под микроскопом для получения чистой культуры. Метод одноячеечной сепарации предъявляет относительно высокие требования к технологии работы.
Микробная культура
1. В зависимости от того, нужен ли кислород во время культивирования, его можно разделить на две категории: аэробная культура и анаэробная культура.
Аэробная культура: также известная как «аэробная культура». То есть, когда этот микроорганизм культивируется, ему нужно добавить кислород, иначе он не будет хорошо расти. В лаборатории скошенные культуры получают путем получения стерильного воздуха извне через ватные тампоны. Большая часть жидкой культуры в колбе Эрленмейера встряхивается шейкером, так что наружный воздух может непрерывно поступать в колбу.
Анаэробная культура: также известна как «анаэробная культура». Таким микроорганизмам не требуется кислород для участия в культивировании. В процессе культивирования анаэробных микроорганизмов самым важным моментом является удаление кислорода из среды.
2. По физическому состоянию среды ее можно разделить на две категории: твердая культура и жидкая культура.
Плотная культура: это метод инокуляции штаммов в рыхлую и богатую питательными веществами твердую среду и культивирования микроорганизмов в подходящих условиях.
Жидкая культура: в экспериментах жидкая культура может вызвать быстрое размножение микроорганизмов и получение большого количества культур. При определенных условиях это также эффективный метод отбора и обогащения бактерий микроорганизмами.
BKMAM biotech поставляет соответствующие лабораторные расходные материалы для микробных культур:
Одноразовые пластиковые круглые/квадратные чашки Петри:
lВысокопрозрачный полистирольный материал (PS);
l Поверхность гладкая и плоская, под микроскопом нет оптических искажений клеток;
l Конструкция штабелирования упрощает штабелирование и хранение;
l Стерилизация оксидом этилена (ЭО);
l Износостойкость и коррозионная стойкость.
Одноразовая пластиковая палочка/петля для прививки:
Полистирольный материал (ПС);
Защита от загрязнения, без эндотоксинов, ДНКаз, РНКаз и пирогенов;
Независимая упаковка стерилизована;
Тонкое мастерство и полные спецификации;
Одноразовый пластиковый разбрасыватель клеток, разбрасыватель бактерий:
Полистирольный материал (ПС);
Защита от загрязнения, без эндотоксинов, ДНКаз, РНКаз и пирогенов;
L-образный дизайн, прост в использовании;
Одноразовое использование, легкий и удобный.
Таблички из нержавеющей стали/одноразовые стерильные со спецификациями:
Табличка со спецификациями из нержавеющей стали изготовлена из нержавеющей стали, а одноразовая табличка со спецификациями изготовлена из пищевого полипропилена (ПП).
Защита от загрязнения, без эндотоксинов, ДНКаз, РНКаз и пирогенов;
Площадь смазывания строго стандартизирована
Одна сторона таблички с техническими характеристиками оснащена ручкой, с которой легко работать.
Стерильная герметичная индивидуальная упаковка во избежание вторичного загрязнения проб и ошибок в результатах.
Одноразовое использование для предотвращения перекрестного загрязнения и снижения рабочей нагрузки
Добро пожаловать к сотрудничеству с нами
Искренне
Майкл Пэн
michael@bkmbio.com